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操作规程 |
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1.
取1.5 ml离心管，加入
Affimag磁珠悬液200 μl ，在
Affimag 磁分离架下分离弃去上清，加入200 μl 洗涤液，洗涤1次，弃去上清
。
2.
冻存抗凝全血5 ml，37 ℃温育，
4 ℃ 2500 rpm离心10 min
，吸取中间白细胞层至1.5 ml
离心管，加500
μ
l生理盐水涡流混匀，4 ℃ 2500 rpm离心10 min，弃上清，重复洗涤一次
。
3.
向管中依次加入200 μl
裂解液和经洗涤的Affimag磁珠，涡流混合，室温放置10 min，在
Affimag磁分离架下分离，弃上清液。
4.
依次用80 %异丙醇200 μl，
70%乙醇200 μl各洗涤2-3次，室温挥干。
5.
加入洗脱液200 μl，涡流混合，室温放置10 min，在Affimag磁分离架下分离，吸取清液，得到DNA溶液。
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注意事项 |
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1. Affimag磁珠悬浮在PBS缓冲液中，使用前请充分混合均匀。
2. 本试剂盒应在
4℃冰箱中贮存，到货后六个月内有效。
3. 缓冲液含有刺激性化合物，操作时请戴乳胶手套，避免沾染皮肤和眼睛。
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常见问题分析 |
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常见问题 |
可能原因与建议 |
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DNA得率较低 |
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全血样品中白细胞含量过低，更换新的全血样品；
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步骤
2洗涤过程中将白细胞丢失，在规定转速下进行离心；
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样品贮存时间过长，使用新鲜的全血样品有助于提高
DNA的收率；
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在步骤
4的淋洗过程中将
DNA丢失，小心操作除去异丙醇和乙醇，降低
DNA的损耗。 |
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DNA片段降解 |
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样品的收集与贮存方法不适合，选择在最佳条件下获得的全血样品 |
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Magline®
基因组
DNA纯化试剂盒提取动物组织基因组
DNA |
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操作规程 |
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样品预处理步骤：
取动物组织（如小牛胸腺）
1.0 g，液氮冷冻研磨至粉末，加入2 ml Lysis BufferB，涡流混合
5 S，室温下裂解10 min，
3000 rpm离心10 min，吸取上层清液作为裂解液
4℃保存备用。
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提取步骤：
1、在1.5 ml Eppendorf管中加入磁珠悬液1 ml，在磁场下分离弃去上清，加入1 ml PBS缓冲液洗涤2次；
2、加入100
μl上述细胞裂解液，1 ml Binding Buffer，涡流混合，室温放置10 min；
3、磁场下分离，弃去上清液；
4、依次用1 ml Washing BufferA，
1 ml Washing Buffer B 各洗涤2次，风干；
5、加入Ellution Buffer 200
μl，室温下洗脱
10 min，磁场分离，吸取清液，得到
DNA溶液。 |
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注意事项 |
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同上 |
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Magline®
基因组
DNA纯化试剂盒提取植物组织基因组
DNA |
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操作规程 |
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样品预处理步骤：
取植物组织（如玉米胚芽）2.0 g，液氮冷冻研磨至粉末，加入10ml Lysis BufferA，混匀，加入10 % SDS 400
μl，混匀，
65℃水浴30 min， 吸取上层清液作为裂解液4℃保存备用。
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提取步骤：
1、在
1.5 ml Eppendorf管中加入磁珠悬液1 ml，在磁场下分离弃去上清，加入1 ml PBS缓冲液洗涤2次；
2、加入400 μl上述细胞裂解液，
1 ml Binding Buffer，涡流混合5 S；室温放置10 min；
3、磁场下分离，弃去上清液；
4、加入1 ml Washing BufferA、
Washing BufferB各洗涤1次，风干；
5、加入Ellution Buffer 200
μl，室温下洗脱
10 min，磁场分离，吸取清液，得到DNA溶液。
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注意事项 |
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同上 |
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Magline®
基因组
DNA纯化试剂盒提取微生物基因组
DNA |
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操作规程 |
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样品预处理步骤：
取处于对数生长期的细菌悬液（如酵母菌悬液）
40 ml，
2000 rpm离心5 min，收集菌体沉淀，加入3 ml ActiveBuffer，
30℃水浴
30 min，加入
Enzyme Buffer 3 ml，
30℃水浴
60min，
2000rpm离心5 min，收集沉淀，加入lysisBufferC3.0 ml, 55℃水浴10min吸取上层清液作为裂解液
4℃保存备用。
■
提取步骤：
1、在1.5 ml Eppendorff管中加入磁珠悬液1 ml，在磁场下分离弃去上清，加入1 ml PBS缓冲液洗涤2次；
2、加入500 μl上述细胞裂解液，
1 ml Binding Buffer，涡流混合
5 s ；室温放置10 min；
3、磁场下分离，弃去上清液；
4、分别加入Washing BufferA和
Washing BufferB各1 ml洗涤，风干；
5、加入Ellution Buffer 200
m
l，室温下洗脱10 min，磁场分离，吸取清液，得到
DNA溶液。
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注意事项 |
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同上。 |
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组氨酸标记重组蛋白纯化试剂盒纯化蛋白
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操作规程 |
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A）
纯化前样品制备
1. 吸取1 ml细胞培养液置于1.5-mL离心管，在6000 rpm离心5 min，弃去上清，将湿菌体置于冰上或在-20
℃
或-70
℃
下冷冻保存。
2. 重悬湿菌体于1 ml吸附液中。
3. 在冰上超声裂解细胞（超声4次，每次30 s，每次间隔10 s）。
4. 在4
℃
下，10000 rpm离心15 min，沉淀细胞裂解碎片。
5. 收集上清备用。
B）蛋白吸附步骤
（下面的操作规程基于100 μl磁珠悬液，其蛋白结合容量为100 μg 组氨酸标记蛋白。 为获得最佳结果，应考虑磁珠用量与待纯化蛋白之间的匹配）
6. 另取新鲜1.5-mL离心管，加入100 μl磁珠悬液和300 μl吸附液，涡旋混合。
7. 将离心管置于Affimag磁分离架上，悬液因磁珠被吸附到壁上而逐渐变为澄清。弃去上清。加入300 μl吸附液，从磁分离架上取出离心管，涡旋混合，磁分离沉淀磁珠，弃去上清。
8. 重复上述洗涤步骤一次。
9. 向管中加入1 ml含组氨酸标记蛋白的样品溶液，室温下涡旋混合或振荡混合15 min。
C）洗涤步骤
10. 将离心管置于磁分离架上，直到悬液变为澄清。弃去上清。从磁分离架上取出离心管，加入200 μl吸附液，涡旋混合，室温放置5 min，在磁分离架下分离，弃去上清。
11. 重复洗涤3次。
D）洗脱步骤
12. 加入200 μl1＃洗脱液，涡旋混合，室温放置5 min，在磁分离架上分离磁珠，吸取清液，得到第一批纯化重组蛋白。
13. 加入200 μl2＃洗脱液，重复上述磁分离操作，吸取清液，得到第二批纯化重组蛋白。
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注意事项 |
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除上述注意事项外还需注意：
样品溶液中
EDTA、
EGTA、组氨酸等络合剂应予以除去，否则将影响纯化蛋白的收率。 |
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常见问题分析 |
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常见问题 |
可能原因与建议 |
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重组蛋白得率较低 |
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重组蛋白以包涵体形式存在，应离心收集包涵体，检测其中的蛋白含量。
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细胞裂解液中的蛋白未被完全吸附，应增加吸附时间。
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蛋白序列不正确，应重新测定克隆的序列。
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重组蛋白被降解，在裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
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吸附蛋白未被完全洗脱，增加洗脱液中的咪唑浓度。 |
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重组蛋白纯度不够 |
内源性蛋白在磁珠上的非特异性吸附，在吸附液中加入10 mmol/L的咪唑，或增加洗涤次数，但可能会影响产品收率。 |
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